肿瘤学论文_SIRT3去SUMO化修饰调节乳腺癌细胞M

文章摘要:目的·研究沉默调节蛋白3 （sirtuin 3, SIRT3）去SUMO化修饰对乳腺癌细胞的增殖和耐药性的影响。方法·用CRISPRCas9质粒pX330-sgRNA敲除MCF7乳腺癌细胞系SIRT3基因，构建SIRT3KO的MCF7细胞系；在此细胞系基础上，利用表达SIRT3K288R （SUMO化修饰位点突变型）和SIRT3 WT （野生型）的反转录病毒，以及空载对照（Vector）病毒进行感染，以构建SIRT3SUMO化修饰位点突变的细胞系及其对照细胞系。3种细胞株在相同条件下培养后进行细胞计数并在显微镜下进行观察，确定细胞数量和形态的变化；用不同浓度的阿霉素分别处理细胞24、48、72 h，检测3种细胞株的耐药程度。结果·成功构建了敲除SIRT3的MCF7细胞系，并利用反转录病毒感染构建了表达SIRT3 K288R和SIRT3 WT以及空载对照的细胞系；通过细胞计数发现，在相同培养时间下，SIRT3 K288R细胞系的增殖速率显著低于SIRT3 WT和Vector细胞系（P=0.000）；在显微镜下测量非黏附性乳腺球群细胞的大小，发现SIRT3 K288R细胞系的直径较SIRT3 WT和Vector细胞系小，增殖缓慢。阿霉素耐药实验结果显示，在细胞培养24、48和72 h时，不同阿霉素浓度（1.25、2.5、5和10μg/mL）处理下的SIRT3 K288R细胞株的活性均显著高于SIRT3 WT和Vector细胞系（均P<0.05）；并且相比另外2个细胞系，阿霉素在SIRT3 K288R细胞系中的半数抑制浓度（IC50）也较高。结论·去SUMO化修饰的SIRT3能抑制乳腺癌细胞MCF7的增殖，但增加其对阿霉素的耐药性。

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项目基金:《上海交通大学学报》 网址: http://www.shjtdxxb.cn/qikandaodu/2021/0924/916.html